UFC5010BK Merck Millipore 超濾管 0.5ml 10KD 用戶指南

——高效生物分子濃縮與純化的實驗室利器

一、產(chǎn)品概述

UFC5010BK 是默克密理博（Merck Millipore）旗下 Amicon® Ultra 系列超濾離心管，專為生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸、抗體等）的濃縮、脫鹽及緩沖液置換設(shè)計。該產(chǎn)品采用 10,000 Dalton 分子量截留（MWCO） 的再生纖維素膜（Ultracel®-10），結(jié)合垂直濾膜與反向旋轉(zhuǎn)回收技術(shù)，可實現(xiàn) 90%以上樣品回收率 和 25–30倍濃縮系數(shù)，適用于 HPLC 前處理、蛋白純化及臨床樣本分析等場景。

二、技術(shù)規(guī)格

• 膜材質(zhì)：Ultracel®再生纖維素

• 截留分子量（MWCO）：10,000 Dalton

• 樣品容量：0.5 mL（最大起始體積）

• 濃縮后體積：15–20 μL（典型值）

• 離心條件：

• 濃縮：14,000 × g（最大），推薦 7,500–10,000 × g

• 回收：1,000 × g（反向旋轉(zhuǎn)）

• 化學(xué)兼容性：pH 1–9，兼容 SDS、Tris-HCl、尿素等緩沖體系

• 無菌性：非無菌，一次性使用

• 存儲條件：15–30°C，保質(zhì)期 3 年

三、核心優(yōu)勢

1. 高效濃縮

• 垂直濾膜設(shè)計減少濃差極化，避免濾膜堵塞，處理時間僅需 10–30分鐘。

• 示例：0.25 mg/mL 細胞色素 c（12.4 kDa）濃縮后回收率 >95%。

2. 高回收率

• 低吸附濾膜與聚丙烯外殼結(jié)合，實現(xiàn) >90% 樣品回收率（稀釋起始溶液）。

• 反向旋轉(zhuǎn)功能確保濃縮物回收，避免吸量誤差。

3. 靈活應(yīng)用

• 支持蛋白、核酸、抗體等生物分子的濃縮與純化。

• 可用于去除引物、連接子或標(biāo)記反應(yīng)中的高分子雜質(zhì)。

四、操作流程

（一）預(yù)處理

1. 潤洗：

• 新管使用前，加入超純水至膜上方，冰浴或 4°C 預(yù)冷 5 分鐘，倒出液體。

• 重復(fù) 1 次，確保膜潤濕。

2. 平衡：

• 將超濾管插入 1.5 mL 離心管中，使用相同型號空管進行離心平衡。

（二）加樣

1. 樣品量：

• 加入體積不超過管頂白線（通常 ≤500 μL）。

• 示例：0.5 mL 1 mg/mL BSA 溶液。

2. 離心：

• 4°C 預(yù)冷離心機，設(shè)置轉(zhuǎn)速 ≤10,000 × g，離心 15–30 分鐘。

• 示例參數(shù)：7,500 × g、25 分鐘（10,000 MWCO 膜濃縮 0.25 mg/mL 細胞色素 c）。

（三）濃縮與回收

1. 濃縮判斷：

• 當(dāng)濾液體積接近 1 mL 時，取 50 μL 緩沖液 +10 μL 濾液，通過 Bradford 法或電泳檢測蛋白泄漏。

2. 緩沖液置換：

• 濃縮至 1 mL 后，加入等體積新緩沖液（經(jīng) 0.22 μm 過濾），重復(fù)離心 3 次。

3. 終體積調(diào)整：

• 根據(jù)需求，將樣品濃縮至 ≤50 μL（如需更高濃度，可降低轉(zhuǎn)速至說明書推薦值以下）。

4. 反向旋轉(zhuǎn)回收：

• 離心結(jié)束后，將超濾管倒置，1,000 × g 離心 1–2 分鐘，回收濃縮液。

（四）清洗與保存

1. 清洗：

• 使用后，用超純水沖洗 3 次，再用 75% 乙醇沖洗 1 次。

• 殘留水可通過 1,000 × g 離心 1 分鐘去除。

2. 保存：

• 干燥后置于 4°C 或 -20°C 保存，避免膜干燥開裂。

五、應(yīng)用案例

1. 蛋白質(zhì)濃縮

• 使用 UFC5010BK 將 1 mL 0.5 mg/mL BSA 濃縮至 100 μL，回收率 92%（7,500 × g、10 分鐘）。

2. 核酸脫鹽

• 0.5 mL 50 ng/μL DNA 溶液經(jīng) 3 次緩沖液置換，鹽濃度從 150 mM 降至 10 mM 以下。

3. 抗體純化

• 從組織培養(yǎng)基中濃縮抗體，結(jié)合 UFC5010BK 與蛋白 A 親和柱，實現(xiàn)抗體純化與脫鹽同步進行。

六、質(zhì)量控制與驗證

1. 批次一致性：

• MWCO 驗證（電泳法）

• 回收率測試（BSA/DNA 標(biāo)準(zhǔn)品）

• 膜完整性檢測（氣泡壓力法）

• 每批次提供 CoA（Certificate of Analysis），包含：

2. 性能驗證：

• 重復(fù)性測試（n=10）：BSA 回收率 CV ≤3%，DNA 濃縮時間 CV ≤5%。

七、注意事項

1. 操作安全：

• 避免膜干燥，潤濕后保持濕潤狀態(tài)直至使用結(jié)束。

• 離心時確保轉(zhuǎn)子平衡，防止離心機損壞。

2. 樣品兼容性：

• 高粘度樣品（如甘油）需稀釋后使用。

• 強酸/強堿溶液可能腐蝕再生纖維素膜，需預(yù)實驗驗證。

3. 離心條件：

• 離心時間過長可能導(dǎo)致蛋白沉淀，建議分步離心并監(jiān)測濾液狀態(tài)。